[Q100] Assessment of statistical significance of minor changes in HOS using circular dichroism

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Circular Dichroism를 이용한 고차구조의 작은 변화에 대한 통계적 유의성 평가

 

1. 소개(Introduction)

바이오시 밀러 및 이노 베이터 바이오 치료제의 개발 동안, 고차 구조 (HOS)에서의 작은 변화를 검출하는 것의 중요성이 잘 알려져있다. 객관적이고 통계적으로 유효한 데이터에 대한 규제 당국의 요구가 증가함에 따라 CD (circular dichroism) 데이터를 포함한 특정 데이터 유형에 대한 문제가 발생합니다. 여기 우리는 엄격한 통계 분석 결과 CD 스펙트럼을 비교 하여 IgG1 다양 한 분해 조건에 적용 한 결과 제시 합니다.데이터 세트 간 차이의 중요성을 객관적으로 평가하여 규제 제출을 강화할 수 있습니다.



2. 방법 (Method)

[샘플 준비 및 CD 분석]
IgG1의 샘플은하기 표에 나타낸 바와 같이 다양한 분해 조건에 적용되었다.
그 후 분취 액을 96- 웰 마이크로 플레이트, 교대 완충액 샘플-버퍼-샘플 등에로드 하였다.
Chirascan Q100을 사용하여 엄격한 통계 분석에 적합한 고품질 CD 스펙트럼 및 미가공 데이터를 생성하고, 각 샘플의 4 개의 독립적 인 복제물을 분석 하였다.

다음과 같이 :
● 2 차 구조 : far-UV (190 to 250 nm, 0.1 mm pathlength flow cell)
● 3 차 구조 : near-UV (250 to 350 nm, 10 mm pathlength flow cell)

 

 

•약 30 분 설정
• 96 웰 플레이트 준비
• 실험 조건 선택

• 무인 조작 (자동화 시스템)
• 24 시간 내에 최대 48 개의 버퍼 샘플 쌍 실행

• 원시 데이터 검사
• 자동 평균 / 기준선 수정
• HOS 비교를위한 통계 분석

 

 

 


 

3. 데이터 해석 

통계 분석을위한 품질 속성을 생성하기 위해 가중 스펙트럼 차이 (WSD) 방법을 사용하여 흡광도-정규화 된 데이터를 비교 하였다. 이 특성은 중간 (Tier2) 위험 순위에 권장되는 +/- 2SD 수용 기준을 갖춘 품질 범위 접근 방식으로 분석되었습니다.

 

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